Методы определения гормонов

Гормоны, имеющие клиническое значение в репродуктивной эндок-ринологии, содержатся в сыворотке в концентрациях, исчисляемых пг и нг/мл. Поэтому, на протяжении нескольких последних десятилетий, были приложены огромные усилия по улучшению чувствительности, специфичности и практичности тестов, проводимых в клинических лабораториях.

Внедрение методики иммунологических тестов стало грандиозным шагом со времени первого описания Ялоу и Берсеном в 1959 году РИА для определения концентрации инсулина. В последнее время масса новых методик, помимо РИА, с использованием вместо изотопных меток неизотопных, обладающих качествами высокочувствительных индикаторов, предлагается для использования в клинических лабораториях (например, энзимы в иммуно-ферментных методах).

Принцип иммунологических тестов заключается в использовании антисыворотки, специфичной в отношении гормона (антигена), который должен быть определен. В упрощенной схеме это может быть изображено как ключ и соответствующий ему замок. Только один ключ из множества имеющихся в наличии может подойти к данному замку, та же концепция имеет место в случае с антигеном, который вступает во взаимодействие только со «своим» антителом в присутствии структурно схожих соединений и чужеродных субстанций, количество кото-рых, во многих случаях, превышает количество специфичных антител в миллионы раз (см. рис. 16).

Специфичность антитела и антигена может быть сопоставлена с соответствием отдельно взятому замку единственно подходящего ключа.

Рисунок 16. Схематическое изображение специфичности взаимодействия антиген-антитело (принцип замка и ключа)

Поскольку комплексы антиген-(гормон)-антитело не могут быть визуально идентифицированы ввиду их малого количества, становится понятным необходимость использования индикаторов (меток) для проведения инструментальной обработки полученных результатов. Эта проблема была решена путем коньюгирования антигена с субстанцией-маркером, определение которой не столь проблематично, например, радиоактивный1251.

Поскольку основу метода составляет определение радиоактивности комплекса антиген-антитело, избыток несвязанной радиоактивной метки (антигена) должен быть удален из сосуда, в котором проводится исследование.

Со времени первого описания РИА, было разработано великое множество радиоиммунных методов определения широкого спектра антигенов.

Главным недостатком данной методики является необходимость использования радиоактивно-меченных веществ, применение которых является предметом строгих ограничений. Зачастую это приводит к тому, что стоимость подобных исследований превышает таковую в нерадиоизатопных лабораториях. Еще одним недостатком методики является тот факт, что 1251, наиболее часто используемый изотоп, имеет относительно короткий период полураспада, равный 60 дням.

Данное положение вещей привело к необходимости разработки не- радиоизотопных иммунологических методик. Целый ряд новых маркеров, перечисленных ниже, было коньюгировано с антигенами или антителами в качестве замены 1251, см. таблицу 6.

Таблица 6. Иммунологические методы, использующие нерадиоактивные маркерные субстанции Тест

Маркер Фермент

Иммуноферментный Флюоресцентная группа

Иммунофлюорисцентный Иммунолюминесцентный

Вещества, производящие хемшпоминесценцию Электроактивные маркеры

Электроиммунологический Спин-иммуноанализ

Стабильные свободные радикалы Фаги 40

Иммуновирусный