<<
>>

МЕТОДИ СТЕРИЛИЗАЦИИ

Вопросы для подготовки по теме.

Понятие об асептике,антисептике,дезинфекции и стерилизации.

Методы стерилизации. Оборудование,режимы и объекты стерилизации фламбированием,горячим воздухом,кипячением, текучим паром.

Принцип дробной стерилизации,тиндализация.

Стерилизация паром под давлением.

Устройство автоклава, порядок работы на нен, режимы и объекты стерилизации. Методы контроля работы автоклава. Требования техники безопасности.

Особенности пастеризации.

Стерилизация фильтрованием. Бактериальные фильтры.

Химическая и физико-химическая стерилизация.

Стерилизация облучением. Оборудование и объекты стерилизации.

Большое значение в микробиологии имеют методы уничтожения, устранения и подавления роста микроорганизмов.

Процесс полного уничтожения в объекте всех жизнеспособных форм патогенных и непатогенных микроорганизмов и их спор называют стерилизацией.

Уничтожение в объекте или окружающей среде возбудителей инфекционных заболеваний (патогенных микроорганизмов) называют дезинфекцией. Она направлена на прерывание передачи инфекционных заболеваний. Дезинфекцию обычно осуществляют с помощью химических соединений, например, карболовой кислоты (фенола), формалина,хлора,йода,сулемы и других веществ. Иногда

процесе дезинфекции может привести к стерилизации объекта.

В медицинской и микробиологической практике широко применяется термин антисептика (septikus - гнилостный), под которым подразумевается использование химических веществ, убивающих или подавляющих рост болезнетворных и других микробов, находящихся в контакте с макроорганизмом. В качестве таких веществ Н.И.Пирогов (1865) применял хлорную воду,азотнокислое серебро,йод, а Д.Листер (1867) фенол. В настоящее время для этих целей используют много других соединений: поверхностно-активные вещества,йодоформ и др. Такие вещества называют антисептиками.

Они нё обладают специфичностью действия и эффективны против бактерій, вирусов, грибов и протозойних организмов,

В 1897 г. Э.Бергман ввел в практику хирургии асептику.

В точном переводе это слово означает отсутствие патогенных микроорганизмов, но в настоящее время термин асептика применяется для обозначения комплекса мероприятий,направленных на то, чтобы не допустить появления каких-либо нежелательных микроорганизмов, например, на операционном поле, в микробиологическом боксе или в цехе,выпускающем стерильные лекарственные формы. Работа микробиологов и хирургов проводится с применением методов асептики. Обычно созданию асептических условий работы предшествует дезинфекция помещения, стерилизация исполь-зуемых инструментов и материалов.

Методы стерилизации-

Их можно подразделить на три группы: физические,химические и физико-химические.

К физическим способам стерилизации относятся: стерилизация

высокой температурой,ультрафиолетовыми лучами, радиоактивными излучениями,ультразвуком, "холодная” стерилизация фильтрованием через специальные бактериальные фильтры.

Одним из самых надежных и наиболее распространенных методов физической стерилизации является стерилизация высокой температурой. Она проводится прокаливанием предметов на пламени горелки (фламбированне), кипячением, сухим жаром (горячим воздухом),паром под давлением и текучим паром.

Прокаливание на пламени - самый быстрый и надежный способ стерилизации благодаря высокой температуре пламени горелки.

На рис. 71 приведено примерное распределение температур в различных частях пламени.

Рис.71. Схема пламени газовой горелки. A-область пламени, в которой горение не происходит (смесь газа с воздухом);В-область восстано-вительного пламени (сгорание газа происходит неполностью- недостаток кислорода; содержатся раскаленные углеродистые продукты распада молекул газа);0-область окислительного пламени (полное сгорание -.избыток кислорода!; 1-300 С: 2-350°С: 3^520o6:n 4-I540°C; 5-1560 С; 6-1550°С;

1540 С<

Этим методом стерилизуют бактериологические петли,пинцеты, предметные стекла к некоторые мелкие инструменты (иглы,крючки, лопаточки).

Для стерилизации обрабатываемый предмет несколько раз проводят через пламя горелки.

При прокаливании происходит сгорание микробов и их спор. Следует,однако,иметь в виду,что прокаливание режущих инструментов приводит к их порче, а стеклянные предметы часто лопаются или плавятся, что ограничивает возможность этого метода.

Стерилизация СУХИМ жаром (или горячим воздухом) проводится в специальных печах Пастера (рис.72) или сушильных шкафах (рис.73). Печь Пастера представляет собой металлический ящик с двойными стенками, с хорошей асбестовой или стекловатной теплоизоляцией, электрообогревателем и терморегулятором.

Сушильный шкаф состоит из корпуса с подставкой I,рабочей камеры 15,две]» 5,блока управления 20 и терморегулятора 21. Корпус с подставкой выполнены из тонкослойного металла и служат для размещения всех основных узлов и деталей шкафа.

В верхней части корпуса установлен контрольный термометр Рис.72. Печь Пастера. 4,защищенный оправой 3. В

основании оправы имеются отверстия для вентиляции,перекрываемые поворотным кольцом 2.

На передней стенке подставки расположены индикатор 7,тумблер 9, предохранители 8, ручка 10. Здесь же (на передней стенке) нанесена окала,служащая для ориентировки при настройке шкафа на нужную температуру.

Рис.73. Шкаф сушильный электрический круглый.

I-корпус с подставкой; 2-кольцо вентиляционное;3-оправа термометра; 4-термометр; 5-дверь; 6-защелка; 7-индикатор; 8-предохранитель; 9-тумблер; 10-ручка; 11-вилка штепсельная; 12-провод; 13-вата стеклянная; 14-трубка нижняя; 15-камера рабочая; 16-17 - ящики;18-полка; 19- экран; 20-блок управления; 21-терморегулятор; 22-дно подставки; 23-дно; 24-нагревательные элементы; a-место установки пломбы.

В процессе работы при отрегулированном терморегуляторе можно установить,какой отметке шкалы соответствует та или иная температура в рабочей камере.

Индикатор 7 сигнализирует о работе шкафа: он включается при его нагреве и отключается при охлаждении.

Рабочая камера представляет собой цилиндрический сосуд, вы-полненный мз тонколистового металла с плоским дном.

Внутри камері, на специальных направляющих уголках расположены: полка 18 и два ящика с перегородками нижний 16 и верхний 17, в которые помещаются для сушки посуда и инструменты. Камера обогревается основным нагревательным элементом 24,намотанным по наружной поверхности камері на изолирующей прокладке из асбестовой бумаги.

На задней стенке камері,расположен дополнительный нагревательный элемент для нагрева датчика терморегулятора. Благодаря последовательному соединению,основной и дополнительный нагревательный элементы находятся в одном токовом режиме,что необходимо для синхронизации обогрева датчика и камеры.

Действие механической части терморегулятора основано на использовании различия коэффициентов линейного расширения двух металлов - алюминия и стали. Регулируемая температура сушильного шкафа от 40° до 200°С.

Он может быть использован для стерилизации стеклянных, металлических и фарфоровых предметов (флаконы,колбы,цилиндры, инструменты,ступки и др.) предварительно завернутых в бумагу для сохранения стерильности после стерилизации. Кроме того в сушильном шкафу можно стерилизовать термостойкие порошкообразные лекарственные вещества (тальк,белая глина,окись цинка и др.), а также минеральные и растительные масла,жиры, ланолин, вазелин, воск.

Режимы стерилизации некоторых объектов в сушильном шкафу приведены в таблице I.

Таблица I. Режимы стерилизации в сушильном шкафу

Объекты стерилизации Стеклянные,ме-таллические и фарфоровые предметы Термостойкие порошко-образные лекарственные вещества Минеральные и расти-тельные масла,жиры, ланолин,вазелин,воск темпера- время тура С мин. вес об- темпера- время ^разца тура и мин. вес об- темпера- время разца тура С мин. *г) 180° 20 до 25 180° 30 200° до 100 180° 30 200° 10 26-100 180° 40 200° 20 101-500 180° 40 200° 20 - 101-200 180° 60 200° 30' _ Кипячение - простейший способ стерилизации игл,шприцев, хирургических инструментов. Для этого можно применять подходящей формы и размеров кастрюлю,подожив на ее дно слой ваты или марли.

Гораздо удобнее пользоваться специальным стерилизатором для инструментов- (рис.74), который состоит из прямоугольного металлического корпуса,металлической сетки и крышки. Нагрев осуществляется газом или электричеством.

Стерилизуемые предметы кладут на сетку,опускают ее в кипящую воду корпуса и закрывают стерилизатор крышкой. Стерилизацию проводят в течение 20-30 минут. После окончания стерилизации выключают нагрев стерилизатора. Вынимают сетку с инстру-

Рис.74. Стерилизатор для инструментов. 1-корпус;

2-сетка; 3-крышка; 4-га- зовая горелка.

ментами из корпуса, вода при этом стекает, а предметы на сетке быстро высыхают; после чего они готовы к работе.

Добавление к воде 1-2% соды значительно повышает стерилизующее действие кипячения и устраняет жесткость воды, что предохраняет металлические предметы от ржавчины после кипячения.

Этот метод не обеспечивает полной стерилизации, так как споры некоторых бацилл выдерживают кипячение в течение нескольких часов.

Стерилизация текучим паром применяется в тех случаях, когда стерилизуемый материал изменяется при температуре выше Ю0°С.

Текучим паром стерилизуют растворы,являющиеся хорошей питательной средой для микроорганизмов (они могут содержать белки ,углеводы,молоко,витамины и т.д.).

Для стерилизации текучим паром используют автоклав (описание см. ниже) с незакрепленной крышкой и открытым паровыпускным краном или специальный аппарат Коха (рис.75).

Аппарат Коха представляет собой металлический цилиндр на дно которого наливается вода; над водой на специальные выступы цилиндрического корпуса кладутся сетки,на которые устанавливается стерилизуемый материал. Сверху аппарат закрывается крышкой с отверстиями через которые пар свободно выходит наружу.

и электрический)

-2 Рис.75. Аппарат Коха.

Та ігтіитюлігий imnrn/r» •

4 указательная колонка;

металлическая сетка;

крышка;6-газовая го

релка (нагрев может быть

Внешняя поверхность цилиндра покрыта теплоизолирующим материалом.

Однократное нагревание стерилизуемого материала проводится при Ю0°С 30-60 мин, считая с момента начала кипения воды. При этом погибают только вегетативные формы микробов,а споровые сохраняют жизнеспособность. Для уничтожения споровых форм прибегают к дробной стерилизации, применяющейся в двух разновидностях:

Нагревают стерилизуемый материал текучим паром в аппарате Коха или автоклаве при Ю0°С 3 раза по 30 мин через каж-

дые 24 часа с вццерживанием стерилизуемых объектов между стерилизациями при температуре 18-37°.

Нагревают стерилизуемый материал в специальных водяных терморегулируемых банях (рис.76) при 60-65°С 5 раз по 60 минут или 70-80°С 3 раза через каждые 24 часа, с выдерживанием стерилизуемых объектов между стерилизациями при температуре 18-37°С. За это время споровые формы микробов прорастают и превращаются в вегетативные,которые погибают при повторных прогревах.

Рис.76. Водяная терморегулируемая баня.

I-ванна;2-корпус;

крышка; 4-контакт- ный термометр;5-конт-- рольный угловой термометр; 6-лит ая станина;

выключатель сети;

сигнальная лампа.

Такой вид дробной стерилизации называют тиндализашей и применяют ее к объектам,содержащим вещества,легко разрушающиеся и денатурирующиеся при температуре Ю0°С (питательные среды,ебдержащие белки,витамины,некоторые глазные капли и т.д.).

Недостаток дробной стерилизации - возможность образования спор вегетативными клетками,образовавшимися из проросших спор.

Водяная баня (рис.76) , в которой можно проводить дробную стерилизацию, представляет собой резервуар для вода, оборудованный электронагревательным элементом и регулятором температуры.

Ванна, в которую заливается вода и помещаются колбы или пробирки,выполнена из нержавеющей стали и заключена в прямоугольный металлический кожух,образующий вместе с ней корпус аппарата. Для уменьшения тепловых потерь между кожухом и ванной проложена губчатая резина.

Контактный термометр,при помощи, которого устанавливается и поддерживается заданная температура,помещен в специальную, закрытую кожухом трубу, сообщающуюся с ванной.

Контроль температуры воды в ванне производится угловым ртутным термометром со шкалой от 0°С до Ю0°С, защищенным оправой. Оправа и термометр закрепляются в горизонтальном положении на передней стенке кожуха. Сверху ванна закрывается крышкой. Для уплотнения на крышке и корпусе имеются резиновые прокладки.Крышка также как и корпус,имеет теплоизоляцию из губчатой резины. Вода сливается из ванны через кран,оканчивающийся штуцером. Выходное отверстие в ванне прикрыто фильтровальной сеткой.

Корпус аппарата четырьмя болтами прикрепляется к литой станине, в ней же находится шасси, на котором смонтированы трансформатор,селеновый выпрямитель и два реле. На передней наклонной стенке станины находится выключатель сети и сигналь-ная лампа.

Пастеризация - однократное прогревание материала в течение I чала при температуре 67-70° или 5-Ю мин при температуре 75-80°С. После прогревания материал быстро охлаждают до Ю°С и сохраняют при такой температуре. Этот метод направлен на уничтожение только вегетативных форм,преимущественно патогенных, микробов. Споровые же формы и многие сапрофитные микроорганизмы сохраняются. Этим методом обрабатывают молоко,вино,пиво и другие продукты. При пастеризации полностью сохраняются витамины и вкусовые качества продуктов. Пастеризованные продукты длительному хранению не подлежат.

Стерилизация паром под давлением

Стерилизация насыщенным паром под давлением - наиболее надежный и чаще всего применяемый способ стерилизации. Он основан на нагревании материала насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного. Известно,что температура пара возрастает при повышении давления (табл.2).

Таблица 2.

Температура насыщенного пара при различных давлениях Давление Температура

°С Нормальное Добавочное атм н/м^(или Па} х Ю5 атм н/м^Сили Па) х Ю5 1,0 1,01325 _ 100 1,0 1,01325 0,5 0,50662 112 1,0 1,01325 1,0 1,01325 121 1,0 1,01325 1,5 1,51987 127 1,0 1,01325 2,0 2,02650 134 Совместное действие высокой температуры и пара обеспечивает особую эффективность данного способа. При этом погибают как вегетативные клетки, так и споры микроорганизмов. Стерилизацию паром под давлением проводят в специальных приборах - автоклавах. Автоклавы бывают различной конструкции (рис.77), но принципиальное их устройство следующее (рис.78). Это металлический двухстенный котел, способный выдерживать высокое давление. Внутренняя часть котла является стерилизационной.камерой (22), в которую помещают подлежащие стерилизации материалы и инструменты. Стерилизационная камера находится внутри паровой камеры (21). ПароЬая камера имеет опорное кольцо (18), в пазу которого помещена резиновая прокладка (19).спускной кран (32) для выпуска воздуха в начале нагрева стерилизатора и выпуска пара по окончании стерилизации; манометр (15) с соединительной муфтой и сифонной трубкой (16). К опорному кольцу (18) приварена петля, к которой на шарнире приклеплена крышка (23). Диаметрально противоположно приварена еще одна петля для шарнирного крепления винта корпуса,прижима (24),которым прижимается крышка (23) к опорному кольцу (18), создавая с помощью резиновой прокладки (19) необходимую герметичность паровой камеры (21).

Пар поступает в паровую камеру (21) из парогенератора (28) по патрубку (9). В процессе работы автоклава образующийся конденсат через этот же патрубок сливается в парогенератор (28). Для прекращения поступления пара из парогенератора в паровую камеру по окончании стерилизации на патрубке установлен вентиль (25). Камера крепится на постаменте (1),где в нижней части его находится парогенератор, имеющий водоуказательную колонку (29) с воронкой (27) для залива воды в парогенератор,электро-

контактный манометр (8) с трехходовым краном (7) и сифонной трубкой (б), предохранительный клапан (26).

Рис.77. Автоклавы. А-вертикальный. Б-горизонтальный.

В крышку парогенератора вмонтированы электронагреватели (4). Снизу парогенератор имеет патрубок с вентилем (3) для питания водой непосредственно от водопровода. Для уменьшения тепловых потерь и защиты обслуживающего персонала от ожогов паровая камера и парогенератор снабжены кожухами. На циферблате манометра (15) через¦отметку 2 кгс/см^, соответствующую максимальному давлению,допускаемому в стерилизаторе,проведена красная черта. Предохранительный клапан (26) отрегулирован на давление пара 2 + 0,2 кгс/см^. Включение автоклава осуществляется нажатием кнопки выключателя (31),при этоы загорается сигнальная лампа ЛСІ "сеть" (13). При наличии достаточного количества воды в парогенераторе включаются электронагрева-

ч 0.0 ь к •«

- х ила sc*

Si* о о лох •«

р.*«еґх ЧЯФСІсвЛЕЯ

¦S № О X

ОН **Ф а i* ST3 і. о і ьпаЛ і і я є*.

Е*ЬЙ К I Я «ЮГ- I Я И оис

in •>оЛойв o+N XS аяоо sow зтз Л Я •*? S

*83ІЗІ

о я я ал клшкч

S I I • * I Ч I I I ОЮ я ла>©MNCO ' «N е*сососэ

•сооооч^ья « pwh і с .> к\р t, m л ® я а I >-<і в .«nn г« gSo і в ж л « ‘ - ¦ - --

»ч Ля аая я —о j «Л5!* 1.е* Я а® я!

• Qо У чю g^g o « л і

о аи а© ¦

OCIfOtV

?й 1 й_1 я © s о ч г s snpq S4* ® о ® о s ао _ . .. _ вн кч* ч я о к юсг> о ям* oi-і я>&я я и и аак bn

2 і .>§§.> і A o'Si

о) . 4д e* ия є- &•« ч <в к я я» i sue

COCI о ч й ‘ ¦—

s nosn

чо Ti*® — .. _ _ _ -

son я ас аая ко n &SCOO я к ІСсіаГо x ®’« a$ ® T s о~ч 4 « " ниявиаь bwt иролчкЗійопor- ф m в ф о

fnи s — jaч К i кЭS * 1ewe. т е* >»

~ ,Sti?+Й2Й-¦*- -----

ОС- Ф« OJ у

•« Я я е* аал« о So Ї с я л йю’-*с0 Т ч'*к\і oooiuKuosoпаян я ч РН к*-* О Лs • м«о ^i® i i* я e f* i* I*H*Я я. я э .»я ••*—і m 2 в

тели (4).

Автоклав имеет устройство для автоматического поддержания рабочего давления. Чувствительным элементом этого устройства является электроконтактный манометр (8), стрелки подвижных контактов которого устанавливаются на деления шкалы,соответствующие пределам допустимого изменения рабочего давления. Для защиты электронагревателей от перегорания, в случае понижения уровня вода,ниже минимального,предусмотрено специальное устройство ,автоматически отключающее электронагреватели. Чувстви-тельным элементом этого устройства является датчик уровня вода ДУ (33).

Понижение уровня вода ниже минимального сигнализируется включением сигнальной лампы ЛС2 "Воды нет" (12). Для подключения защитного заземления на электрощите автоклава предусмотрен специальный болт (10).

ПОРЯДОК работы на автоклаве

Через воронку (27) заполняют парогенератор (28) водой до уровня выше нижней отметки на кожухе (29) водоукаэательного стекла.

Включают выключатель (31), при этом загорается сигнальная лампа (13) "сеть".

При достижении давления пара в парогенераторе,соответствующего режиму стерилизации,открывают спускной кран (32), затем вентиль (25) на 0,5-1,5 оборота. При этом давления

пара в стерилизационной камере (22) должно быть 0,1-0,2 кгс/см^.

[Здесь следует отметить,что давление,измеряемое манометром в стерилизационной камере,(т.е. показания манометра) является дополнительным к нормальному и выражается в технических атмосферах (ат или кгс/см^). Техническая атмосфера несколько отличается от физической, в связи с чем в дальнейшем при указании режимов стерилизации дополнительные давления и соответствующие им температуры будут численно отличаться от данных, приведенных в таблице ?5.

Появление через отверстие крана непрерывной струи пара считать началом продувки (вытеснение воздуха . из стерилизационной камеры и стерилизационных коробок),которая продолжается в течение 15 ыин. Необходимо,чтобы из автоклава был удален весь воздух,так как губительное действие насыщенного перегретого пара на бактерии значительно сильнее, чем его смеси с воздухом. Это связано с тем,что при одном и том же давлении тем-пература чистого пара выше температуры смеси пара и воздуха.

По окончании продувки закрывают кран (32), открывают полностью вентиль (25) и доводят давление в стерилизационной камере до показания,соответствующего режиму стерилизации.

При достижении заданного рабочего давления, которое совпадает с первым автоматическим отключением электронагревателей, отмечают время начала стерилизации.

Режимы стерилизации насыщенным паром под давлением, рекомендуемые общей статьей "Стерилизация", подготовленной для XI изд. Государственной фармакопеи СССР следующие: 119-121° (дополнительное давление I,0-1,1 ат) в течение 8-15 минут, в некоторых случаях до 120 минут или при 110°(дополнительное давление 0,5 ат) в течение 30-60 минут.

По окончании времени стерилизации закрывают вентиль (25).выключают электронагреватели и выпускают пар из паровой

камеры через спускной кран (32) в атмосферу или сосуд с водой в течение 15 мин. Так можно поступить только в том случае, когда среди стерилизуемых объектов нет водных растворов. Если стерилизации подвергали растворы, жидкие питательные среды, то кран (32) открывать нельзя до тех пор пока давление в паровой камере не упадет до 0. Преждевременное открывание крана недопустимо, так как перегретые среды при резком снижении давления сразу же бурно закипают, смачивают и даже иногда выталкивают ватные пробки. Это может нарушить впоследствии стерильность материала.

После того как давление в паровой камере (21) по манометру (Т5) упадет до 0 и из шланга спускного крана прекратится парение, открывают крышку камеры автоклава и приступают к выгрузке стерилизуемого материала.

При проведении последующих стерилизаций необходимо иметь в виду:

а) если уровень воды выше нижней отметки уровня на кожухе водоуказательного стекла, то воду в парогенератор можно не добавлять;

б) если уровень воды ниже нижней отметки, то следует добавить воды.

Стеклянные, металлические и фарфоровые предметы стерилизуют в автоклаве при 119-121° С дополнительное давление 1,0-1,1 ат) в течение 20-40 минут; перевязочные материалы (вата,алиг- нин, марля), лигатурный шелк, белье, фильтровальную бумагу, корковые и резиновые пробки, пергамент, изделия из резины, целлюлозы, древесины стерилизуют при 119-121° {дополнительное дав-ление I,0-1,1 ат) в течение 20-30 минут; минеральные, растительные масла, жиры стерилизуют в автоклаве при тех же условиях в течение 120 минут в герметически закрытых сосудах. Растворы для инъекций, глазные капли,дистиллированную воду и воду для инъекций стерилизуют насыщенным паром при 119-121° ( дополнительное давление I,0-1,1 ат), при И0°(дополнительное давление 0,5 ат) или текучим паром при 100°(см. таблицу 3).

Таблица 3.

Режимы стерилизации в автоклаве. Объем образца в мл Температура Время в минутах до 100 119-121° 8 100° или 110° 30 101-500 119-121° 8-12 100° или 110° 45 501-1000 119-121° 12-15 100° или 110° 60 Для контроля действия автоклава пользуются различными веществами, имеющими определенную точку плавления,например,бензонафтолом - температура плавления 110°;антипирином - 113°?резорцином и серой - 119° и бензойной кислотой - 120°. При испытании в стеклянную трубочку,длиной 5-6 ем,запаянную с одного конца, насыпают одно из перечисленных выше веществ,прибавляют немного сухой анилиновой краски (фуксин,сафранин,бриллиантгрюн и др.) и трубочку запаивают. Трубочку с порошком помещают в автоклав между стерилизуемыми предметами. Если температура в автоклаве достаточна,вещество расплавится и ярко окрасится в цвет,соответствующий взятой краске.

Контроль работы автоклава можно осуществлять и с помощью

192

бактериологических тестов. Биотесты изготавливаются бактериологическими лабораториями СЭС или лабораториями дезинфицирующих станций из образцов почвы, содержащей споры сапрофитов, выдерживающие в течение 3-5 мин. воздействие пара с температурой 120°С. Не менее трех образцов почвы, завернутых в пергаментную, а затем в фильтровальную бумагу, вместе с максимальным термометром закладывают в коробки со стерилизуемым материалом. Бне коробок в верхнюю и нижнюю части стерилизационной камері кладут еще две биопробы. По окончании работы автоклава пробы земли вместе с контрольными (непрогретыми) образцами направляют в бактериологическую лабораторию СЭС на исследование. При соб-людении правил асептики каждую пробу засевают в 20 мл питательной среды. (мясо-пептонный сахарный бульон и полужидкий мясо-пептонный агар). При посеве наружную обертку развертывают, стерильными ножницами срезают угол пакета и содержащуюся в нем землю высыпают над пламенем горелки в пробирки с питательными средами. Посевы инкубируют в термостате 7 суток при 37°С. При появлении микробного роста из первичного посева производят высев на мясо-пептонный агар для выявления споровой микрофлоры. Рост вегетативной формы (сарцины,кокки) расценивается как загрязнение питательной среды в момент посева вследствие нарушения правил асептики. При наличии в питательных средах роста спорообразующих микроорганизмов бактериологический контроль повторяют и производят проверку технического состояния автоклава.

В приложении №1 "Наставлений и нормативных материалов по аптечному делу" (Выпуск 1У,Т979,М) приведены правила работы на паровых стерилизаторах (автоклавах).

Отметим из них лишь те, которые являются дополнением к правилам работы на автоклаве, изложенным ранее.

Установка, эксплуатация и содержание автоклавов должны осуществляться в строгом соответствии с требованиями Инструкции по их эксплуатации, приложенной заводом изготовителем

и Правил техники безопасности при работе на автоклавах,утвержденных президиумом ЦК профсоюзов медицинских работников и Министерством здравоохранения СССР 30 марта 1971г.

Обслуживание автоклавов поручается только лицам, достигнувшим 18-летнего возраста, прошедшим предварительно медицинский осмотр, курсовое іобучение, аттестацию в квалификационной комиссии и инструктаж по безопасному обслуживанию автоклавов.

Перед началом работы необходимо проверить состояние автоклава и контрольно-измерительных приборов. При обнаружении неисправностей (трещина в водоуказательном стекле,крышке или корпусе автоклава, разрыв прокладки, смещение стрелки нанометра і нуля и т'.д.) стерилизовать в автоклаве запрещается. Сотрудник, работающий с автоклавом, обязан немедленно сообщить

об этом управляющему аптекой или ответственному за эксплуатацию автоклавов, чтобы принять меры и устранить выявленные недостатки .

При стерилизации в автоклаве текучим паром стрелки контактного манометра целесообразно установить на 0,1 ати, чтобы иметь возможность по звуковому сигналу отключения авток-лава (щелканье) контролировать начало кипения воды в парогенераторе .

Если требуется просушить вспомогательный простерилизо- ванный материал (вату,фильтровальную бумагу и другие предметы^

поглощающие влагу), необходимо после выпуска пара и конденсата из стерилизационной камеры, не открывав крышки автоклава, пустить в действие водоструйный насос. Для этого сначала открывают у водоструйного насоса вентиль на трубе для подачи водопроводной воды, а затем вентиль (32) для отсасывания воздуха.

Сушить следует при вакууме не менее - 0,5 ати (кгс/ем^)

Ю мин.

После окончания просушивания необходимо сначала закрыть вентиль для отсасывания воздуха, а затем вентиль для подачи воды из водопровода, открыть вентиль, соединяющий стерилизационную камеру с атмосферой и выгрузить просушенный материал.

Заполнять воздухом стерилизационную камеру после просушивания материала следует через фильтр со стерильной ватой.

Стерилизация фильтрованием

Стерилизация фильтрованием применяется в тех случаях, ког да субстраты не выдерживают нагревания, в частности для сред, содержащих белки, для сывороток, некоторых антибиотиков, витаминов, летучих веществ, например, некоторых углеводородов. Способ заключается в фильтровании жидкости через специальные фильтры, имеющие мелкопористые перегородки и поэтому задерживающие клетки микроорганизмов. Причем здесь имеет место не только механическая задержка, но и адсорбция микроорганизмов на стенках (поверхностях), ограничивающих поры, вследствие того что большинство микроорганизмов в водных суспензиях несет на своей поверхности отрицательный заряд, а фильтры изготавливаются из положительно заряженных материалов.

Как правило, бактериальные фильтры пропускают вирусы и бактериофаг.

В настоящее время для стерилизации наиболее широко используются два типа фильтров: мембранные фильтры и фильтры Зейтца.

Мембранные фильтры готовят из коллодия, ацетата целлюлозы и других материалов. Они представляют собой диски, напоминающие бумажные, толщиной около 0,1 мм. Диаметр мембранных фильтров может быть разным. Отечественная промышленность выпускает мембранные фильтры диаметром 35 мм. В зависимости от размеров пор они обозначаются № 1,2,3,4,5 (см. таблицу 4).

Таблица 4. Характеристика мембранных Фильтров Номер фильтра Средний диаметр пор, мкм I 0,35 2 0,5 3 0,7 4. 0,9 5 1,2 Фильтры Зейтца - это плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой. Отечественные асбестовые фильтры обозначаются марками Ф^ и СФ. Стерилизующими являются фильтры марки 0Ф. Помятые асбестовые пластинки, а также пластинки с надломами и трещинами для работы непригодны. Приборы для стерилизации фильтрованием изображены на рис. 79.

Кроме того, для стерилизации применяются фильтры, изготов-ленные из каолина с примесью кварцевого песка ("свечи" Шамбер- лана), из инфузорной земли ("свечи" Берйефельда,рие.8о)и из других материалов.

Фильтр

Рис.79. Приборы для стерилизация фильтрованием А-со стеклянным держателем; Б-с металлическим держателем.

'rnq

41

Рис.80. Свеча Беркефельда.

Фильтры с обозначением L наиболее пористые. Они пропускают все бактерии. Свечи L-jbis и ь2 задерживают клетки только крупных бактерий. Свечи задерживают споры столбняка и палочку дифтерии. Затем в порядке уменьшения размеров пор свечи обозначаются отЬ^ до ь13. Свечи, предназначенные, главным образом, для фильтрации воды, обозначаются Р и В , причем, по своей пористости свечи F соответствуют , а свечи В - Ь7

Форма свеч Шамберлана может быть разной. Свечи Беркефельда имеют обозначения w , н и v , что соответствует диаметрам

4, 5-7 и 8-12 мкм.

Работа с бактериальными фильтрами осуществляется следующим образом. Фильтр должен быть закреплен в специальном держателе, который вставлен в приемник фильтрата. Обычно приемником является колба Бунзена. Для мембранных фильтров имеются многочисленные держатели, приспособленные для фильтрования различ-

ных объемов жидкостей. Есть, например, держатель, изготовленный целиком из стекла, в котором в качестве опоры фильтра используется крупнопористый стеклянный диск. Есть металлические держатели. Держатели для фильтров Зейтца изготавливают в большинстве случаев из нержавеющей стали. Асбестовая пластинка крепко зажимается винтами между верхней (цилиндр без дна) и нижней (воронкообразный тубус) частями держателя (рис.79). Опорой для асбестового диска служит сетка или пористая пластинка из нержавеющей стали. Трубка фильтра, по которой стекает фильтрат, через резиновую пробку проходит в колбу Бунзена. Свечи Шамберлана вставляют непосредственно в резиновую пробку. Перед употреблением фильтры, их держатели и приемник фильтрата должны быть простерилизованы. Мембранные фильтры можно стерилизовать, поместив их в дистиллированную воду, автоклавиро- ванием при дополнительном давлении I ат 15 минут или длительным кипячением. Сосуд с фильтрами должен быть закрыт ватной пробкой. Держатель вместе с резиновой пробкой заворачивают в бумагу и автоклавируют при дополнительном давлении I ат 20-30 мин. Прибор собирают в асептических условиях непосредственно перед работой. Стерилизация мембранных фильтров вместе с держателем не рекомендуется, так как может привести к их повреждению.

Фильтр® Зейтца автоклавируют в собранном виде. Свечи стерилизуют в автоклаве вместе с резиновой пробкой. Перед стерилизацией их заворачивают в бумагу и хранят в таком виде до употребления. Колбу Бунзена закрывают ватной пробкой. В отводную трубку, которая будет присоединена к вакуумному насосу, вставляют ватный тампон, и в таком виде приемник стерилизуют. Непосредственно перед работой ватную пробку колбы Бунзена быстро заменяют держателем с фильтоой, а отводной конец колбы соединяют с предохранительной склянкой, находящейся перед насосом (рис. 81) Тампон из отводного конца не вынимают, чтобы сохранить стерильность приемника. Разливку профильтрованных сред производят в стерильных условиях в заранее простерилизованную посуду. Так же как и при термической стерилизации, разлитые среды 2-3 суток выдерживают при 30°С. Если в них обнаружится рост микроорганизмов, среды готовят заново.

Мембранные и асбестовые фильтры раечитаны на одноразовое использование. Свечи после использования сначала промывают дис-

Рис.81. Фильтровальный прибор со свечой Шамоер- лана.

тиллированной водой, прокачивая ее в направлении, обратном фильтрованию. Затем свечи заливают на ночь концентрированной серной кислотой, содержащей небольшое количество нитрата натрия и хлорнокислого калия (КС104). На следующий день их многократно про- • мывают дистиллированной водой, а затем кипятят в воде для удаления растворенного воздуха. Свечи не следует мыть смесью двухромовокислого калия с серной кислотой, так как хромат адсорбируется на фильтре, что может привести к повреждению фильтра и испортить фильтрат. Нельзя обрабатывать свечи концентрирован-ными растворами щелочей, так как это может увеличить размеры пор. Для очистки свечей от посторонних частиц органического происхождения их можно прокаливать в муфельной печи.

Следует учитывать, что состав жидкостей, прошедших через бактериальные фильтры, может меняться вследствие адсорбции на фильтрах ряда веществ, таких, как, например, некоторые жирные кислоты, белки, полисахариды и др. В результате среды могут оказаться непригодными для культиворования данных микроорга-низмов. Возможность и степень адсорбции веществ на фільтре определяется химической природой фильтра, размерами его пор, временем фильтрования.

Химическая и Физико-химическаястерилизация. Газовая стерилизация

Химическая стерилизация основана на губительном действии химических веществ на микроорганизмы. Она применяется для об-работки вакцин,сывороток и других биопрепаратов, консервируемых различными антисептиками (хлороформ,хинозол, мертиолат,фенол, трикрезол и др.).

К химической стерилизации относится также газовая стерилизация. Исследования последних десятилетий позволили установить способность некоторых газов убивать споры. К этим так называемым стерилизующим газам относятся формальдегид, окись этилена и р-пропиолактон. Применявшиеся прежде хлор и серный ангидрид, оказывают сильное разрушающее действие и слишком токсичны, для того, чтобы ими можно было широко пользоваться. Пре- ицущество газов как стерилизующих веществ состоит в том, что их применение не требует нагревания, кроме того, их можно применять для стерилизации больших объемов, например, помещений и т.д. Однако, они действуют лишь на открытые поверхности и должны применяться в определенных условиях температурі и влажности.

Формальдегид является очень раздражающим газом. Если формальдегид применять без соблюдения особых предосторожностей, то он полимеризуется с образованием паральдегида, оседающего в виде белой пленки на всех поверхностях. Поэтому его не следует применять в помещениях, где имеется ценное оборудование. Макси-мальный эффект получают при относительной влажности 70% и температуре около 22°. Пары формальдегида плохо проникают в шерстяные ткани. Теперь формальдегид применяют значительно реже, чем раньше.

При стерилизации пищевых продуктов, лекарственных препаратов и различных приборов, а также в лабораторной практике оправдало себя примейёние окиси этилена * которая

ч ч'

убивает как вегетативные клетки так и споры, но действует только в том случае, если подвергаемые стерилизации материалы содержат 5-15% влаги. Окись этилена применяется в газовой смеси с бромистым этилом, азотом или двуокисью углерода. На долю окиси этилена при этом приходится от 2 до 50%. Стерилизацию материалов проводят в герметических сосудах, например, автоклавах, или специальных контейнерах. Для стерилизации нестойких органических жидкостей, например, бактериологических культуральных сред, окись этилена можно применять в жидком состоянии. Для этого среду ..смешивают с окисью этилена (до 1%) при температуре 10°. После нескольких часов контакта окись этилена удаляют путем кратковременной инкубации при 37°.

Для стерилизации термолабильных веществ в растворах часто используют также р-пропиолактон:

СНр С = 0

12 і

СН2 о

Он значительно активнее окиси этилена, но обладает по некоторым данным, довольно сильным канцерогенным действием и вызывает некоторые другие побочные физиологические эффекты, р-Пропиолактон прибавляют к готовой питательной среде в количестве 0,2% и оставляют на 2 часа при 37°. При хранении питательной среды в течении ночи, р-пропиолактон полностью разлагается и улетучивается. Углеводы при этом не затрагиваются, р-Пропиолактон применяют для стерилизаций вакцин, различных трансплантантов тканей и других нестойких биологических материалов.

Применительно к производственным условиям перспективным становится аэрозольный метод стерилизации. Этод метод предусматривает применение препаратов для деконтаминации ( contaminatio - загрязнение, заражение) воздуха в виде мелкодисперсных аэрозолей и крупнодисперсных - для стерилизации поверхностей.

Для деконтаминации используют-трех-и шестипроцентные водные растворы перекиси водорода. Первый расчитан на уничтожение вегетативной микрофлоры при ежедневной уборке цехов, второй - на уничтожение спор и должен применяться при генеральных убор-

:ах помещений.

Полная деконтаминация всех поверхностей,размещенных в трех плоскостях (на полу,стенах и потолке), обсемененных золотистым стафилококком,достигается при распылении 3%-ного раствора перекиси водорода в количестве 100 мл/м^, гибель спор антракоида (Вас. anthracoides ) наблюдается при использовании 6%-ного раствора перекиси водорода в дозе 300 мл/м^.

К Физико-химическим методам стерилизации относятся те методы, в которых физическое и химическое воздействие на микроорганизмы используется совместно. Например, в проекте общей статьи "Стерилизация" для XI издания Государственной Фармакопеи СССР для обеспложивания некоторых растворов предлагается добавление к ним 0,5% фенола или 0,3% трикрезода, а также насыщенного раствора хлорбутанолгидрата с последующим нагреванием их до 80° и выдержкой в таких условиях не менее 30 минут.

Инъекционные растворы таким методом стерилизовать нельзя.

Стерилизация облучением.

Ультрафиолетовые лучи ртутно-кварцевой лампы широко исполь зуются для обезвреживания воздуха лечебных учреждений,многолюдных цехов завода.

Действие этих лучей обеспечивает также асептичность посевов и пересевов больших объемов материала на заводах бродильной промышленности при производстве антибиотиков и т.д. Можно использовать ультрафиолетовые лучи для стерилизации прозрачных растворов некоторых термолабильных веществ (белков,витаминов, антибиотиков и др.).помещенных в сосуды, выполненные из кварцевого стекла. Причем сосуды необходимо при этом периодически встряхивать, так как ультрафиолетовое излучение обладает очень малой проникающей способностью (слой воды, например, ультрафиолетовые лучи способны "пробить" толщиной всего лишь в несколько десятков микрон). Гарантии полного уничтожения всех микроорганизмов в стерилизуемой ультрафиолетовым облучением жидкости нет.

Отечественной промышленностью выпускаются бактерицидные лампы БУФ-15 и БУФ-30, а также 0БП-300 (облучатель бактериоцид- ннй потолочный). Длина волны, излучаемая этими лампами, равна 260 нм (ммк) и является наиболее губительной для микроорганизмов. Это связано с тем, что пуриновые и пиримидиновые основания входящие в состав ДНК и РНК, обладают максимумом поглощения именно при длине волны 260 нм. Облучение ультрафиолетом вызывает образование ковалентных связей между остатками тимина в цепях ДНК. Этот процесс димеризации тимина частично или полностью подавляет репликацию ДНК.

Более губительным по сравнению с ультрафиолетовыми лучами является действие на микроорганизмы таких излучений как альфа- -частицы,протоны, дейтроны,электроны и позитроны, а также рентге новекое и гамма-излучения. Антимикробное действие указанных ионизирующих излучений связано с количеством энергии, которое поглощается клеткой. Поглощенная доза отличается от дозы излучения, падающей на излучаемый объект •'экспозиционная доза). Единицей экспозиционной дозы рентгеновского и гамма-излучения является кулон на килограмм (к/кг) и определяется как экспо-зиционная доза, при которой сопряженная корпускулярная эмиссия на килограмм сухого атмосферного воздуха производит в воздухе

ионы несущие заряд в I кулон электричества каждого знака. Внесистемной единицей экспозиционной дозы является рентген (р) - такое количество рентгеновского или гамма-излучения,которое

9 о

вызывает образование 2,1*10 пар ионов в I см сухого воздуха

при температуре 0° и давлении 760 мм рт.ст. (р=2,57976*10“^

к/кг).

Единицей поглощенной дозы является джоуль на килограмм.

Эта единица оценивается следующим образом: "Джоуль на килограмм - поглощенная доза излучения,измеренная энергией в один джоуль любого вида ионизирующего излучения,переданной массе в один килограмм облученного вещества", ГОСТ 8843-63 допускает использование внесистемной единицы поглощенной дозы излучения - -рад. Один рад соответствует поглощению 100 эрг/г и равен 10 дж/кг. В воздухе 1р=0,88 рад. Кроме единиц дозы джоуль на килограмм,рад и рентген в практике используется еще единица Бэр - биологический эквивалент рада.Бэр - единица дозы любого вида ионизирующего излучения в биологической ткани,которая создает тот же биологический эффект,что и доза в I рад рентгеновского или гамма-излучения. В зависимости от того, как- рас- , ходуется энергия того или иного вида излучения при взаимодействиях с веществом,как распределяются в веществе ионы при различ- • ных видах и энергиях излучения, но при одной и той же дозе,биологическое действие различных излучений будет разным. Если условно принять биологическую эффективность гамма-излучения за единицу, то для альфа-частиц она будет равна 10, для медленных нейтронов - 5, для быстрых - 20.

Бактерицидный эффект ионизирующих излучений связан с образованием свободных радикалов,с активацией молекул цитоплаз-

мы и ядра клетки, е косвенным действием излучений на вещество, с которым они взаимодействуют. Все эти механизмы приводят в конечном итоге к глубоким изменениям клеток, к разрушению и гибели микроорганизмов.

Использование новых материалов и упаковочных средств, новых синтезированных препаратов, не выдерживающих ни химических, ни термических способов обработки, делает лучевую стерилизацию важным видом стерилизации в различных отраслях медицинской промышленности. Основные качества, характеризующие лучевую стерилизацию: возможность обработки термолабильных препаратов и материалов; обработка объектов различного объема в упаковке из бумаги, стекла, пластмассы; возможность включения лучевой стерилизации в непрерывный, производственный процесс; стерилизация готовой продукции в уже упакованном виде.

Метод радиостерилизации должен удовлетворять двум требованиям: во-первых, облучение должно оказывать на микроорганизмы бактерицидное действие , во-вторых, радиостерилизация не должна изменять качеств и свойств обрабатываемых объектов. С помощью ионизирующих излучений стерилизуют перевязочные материалы, хирургические инструменты, некоторые лекарственные препараты, в том числе антибиотики и гормоны, биологические ткани и т.д.

Ионизирующие излучения используют также при производстве вакцин и стерилизащи токсинов. Особенно перспективен метод лучевой стерилизации различных изделий одноразового пользования, изготовляемых из пластмасс, например, систем службы крови и шприцев.

Выбор дозы радиационного облучения зависит от объекта,под-

лежащего стерилизации, его инициальной контаминации и необходимой степени надежности стерилизации. Для большинства объектов выбрана доза облучения равная 2-4 Мрад (ІМрад или I мегорад равен Юь рад).

. Для стерилизации используют радиационные установки трёх типов: изотопные, в которых применяют в качестве источника гамма-излучения CobJ, ускорители электронов и источники излучения, связанные с атомными реакторами. Радиационная стерилизация пока остается экономически более дорогой по сравнению с другими видами стерилизации из-за необходимости значительных капитальных затрат на строительство специальных радиационных установок и закупку радиактивных источников, стоимость которых остается пока очень высокой. Однако, -как показали экономические расчеты некоторых зарубежных фирм, эти затраты могут быть полностью окуплены в течение первых 1-2 лет эксплуатации установок. Эти расчеты оказались справедливыми при использовании не только радиоактивных изотопов в качестве источника излучения, но и ускорителей. Несмотря на более высокую стоимость стерилизации радиационной обработкой, отказаться от метода стерилизации облучением нельзя, он остается единственной возможностью для стерилизации множества изделий и препаратов, не выдерживающих обработки теплом и химическими веществами.

Обработка ультразвуком как метод стерилизации применяется крайне редко из-за своей малой эффективности. Некоторые исследователи пытались использовать ультразвук для приготовления вакцин, обеспложивания лекарственных препаратов и т.п.

Литература

Башков В.И. Антимикробные средства и методы дезинфекции. М.,"Медицина",1977.

Ежов Г.И. Руководство к практическим занятиям по сельскохозяйственной микробиологии. М.,"Высшая школа", 1974. Лебедева М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.."Медицина",1973. Обеспечение стерильности процесса биосинтеза и получение стерильных лекарственных препаратов. (Материалы Всесоюзного совещания, г.Пенза, II—12 апреля 1978).

Пименова М.Н., Г р е ч у ш к и н а Н.Н. .АзоваЛ.Г. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., "Издательство.Московского университета",1971.

П р и к а з по Министерству здравоохранения СССР и Министерству медицинской промышленности № 376/207 от 19 апреля 1974 "0 введении в действие единых" методических правил в области радиационной стерилизации медицинской продукции".

Туманян М.А., К ау ш а некий Д.А. Радиационная стерилизация. М.."Медицина",1974.

Фармакопейная статья. Стерилизация (проект). Издание официальное. Министерство здравоохранения СССР. Наставления и нормативные материалы по аптечному делу. Выпуск ІУ, М., 1979.

<< | >>
Источник: Н.П.ЕЛИНОВ. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИМ ОСНОВАМ МИКРОБИОЛОГИИ . 1982. 1982

Еще по теме МЕТОДИ СТЕРИЛИЗАЦИИ:

  1. Тема 10. АСЕПТИКА, АНТИСЕПТИКА, ДЕЗИНФЕКЦИЯ,СТЕРИЛИЗАЦИЯ. МЕТОДЫ АСЕПТИКИГ ДЕЗИНФЕКЦИИИ СТЕРИЛИЗАЦИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В УСЛОВИЯХ АПТЕКИ.МЕТОДЫ КОНСЕРВАЦИИ МЕДИЦИНСКИХ ПРЕПАРАТОВ
  2. Химическая и физико-химическая стерилизация
  3. МЕТОДИ СТЕРИЛИЗАЦИИ
  4. 2.2. Стерилизация инструментов
  5. 5.2. Инструментальные методы диагностики хронического панкреатита
  6. Методики кесарева сечения,вьіполняемьіе при наличии инфекции
  7. Глава 2Лабораторные и инструментальные методы исследования
  8. Глава 38 Методы обследования гинекологических больных
  9. Глава 3МЕТОДИКА ИЗЪЯТИЯ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ И КОНСЕРВАЦИИ
  10. ХИРУРГИЧЕСКИЕ МЕТОДИ КОНТРАЦЕПЦИИ
  11. Оперативньїе вмешательства при стерилизации женщин
  12. ХИРУРГИЧЕСКИЕ МЕТОДЬІКОНТРАЦЕПЦИИ
  13. Термические методы стерилизации
  14. Методики разреза матки. Рождение плода и последа