ПОЛУЧЕНИЕ СФЕРОПЛАСТОВ И ПРОТОПЛАСТОВ

Вопросы для подготовки по теме

Протопласты и еферопласты,их свойства.

Микоплазмы и L -формы бактерий.

Методы получения протопластов и сферопластов.

Если у микробных клеток полностью удалить клеточную стенку, образуются особые структуры,называемые протопластами.

Для.разрушения клеточной стенки обычно используют лизоцим (фермент - мураминидазу).пищеварительный сок яблочной улитки Aeii;; >о;ст.?іцпредставляющий собой сложный комплекс ферментов, и некоторые микробные ферменты, например, эндо- - (1-3) глюканазу. Кроме того, протопласты можно получить с помощью

пенициллина, который нарушает процесс синтеза элементов клеточной стенки микробов.

Пенициллин действует только на молодую культуру микроорганизмов, у которых происходит синтез структурных элементов клет-ки.

Обычно при применении лизоцима и пенициллина из грамполо-жительных микроорганизмов образуются протопласты, а из грамот-рицательных - сферопласты, т.к. в оболочке грамотрицательных микробов значительно меньше мурамовой кислоты, на которую специфически воздействуют эти вещества. Протопласты и сферопласты имеют цитоплазматическую мембрану.У протопластов сохраняются такие процессы как рост,синтез белка, дыхание, но они не способны к делению, т.к. не синтезируют компонентов клеточной стенки.

Цель работы: получить сферопласты Proteus vulgaris.

Материалы: культура P.vulgaris на МПА; питательные среды- МПБ, среда с пенициллином в пробирках по 5 мл (смГЛриложение"), изотоническая среда - МПБ с Ъ% сахарозы; краска метиленовая синяя 1:40.

Постановка опыта. Приготовить взвесь культуры в КЛБ по 500 млн стандарту. Выращивать 5 час при 37°С. Микроскопировать, приготовив мазок и окрасив его по Граму, обратить внимание на особенности морфологии бактерии (грамотрицательная палочка). Внести Т мл 5-часовой бульонной культуры в среду с пенициллином, выращивать 18 час при 37°С. Микроскопировать полученный материал в препарате "раздавленная капля", окрасив препарат ме тиленовой синью (смешать каплю культуры с каплей красителя). Сферопласты круглой формы, значительно крупнее нормальных клеток протея, синего цвета, т.к. они из-за отсутствия клеточной стенки лучше воспринимают краситель.

Посеять сферопласты на изотоническую среду, выращивать 18 час при 37°С. Наблюдать реверсию сферопластов в нормальные клетки, окрасив мазок по Граму.

Литература

БлиновН.П. Общие закономерности строения и развития микробов продуцентов биологически активных веществ. I.,1977

Ка ш к и н П.Н. , Е‘л и н о в Н.П., К а ш к и н К.П. Микробиология. 1970.

М о т а в к и наИ.С. ,АртемкинВ.Д. Атлас по микробиологии и вирусологии. М.',1976.

СтейниерР., ЭдельбергЭ., ИнгрэмДж. Мир микробов. М.,1979, т.1,2,3.

Ш л е ге л ь Г. Общая микробиология. 1972.